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關(guān)注油料安全，皖儀科技離子色譜儀測(cè)定油料種籽中糖類(lèi)成分

方案概述

前言：

糖的含量對(duì)食品的品質(zhì)有極為重要的影響，因此準(zhǔn)確測(cè)定糖的具體組成及含量對(duì)食品加工特性及研究食品的風(fēng)味特性有極為重要的作用。對(duì)于油料種籽，糖類(lèi)物質(zhì)是風(fēng)味物質(zhì)的主要前體物，油料種籽中糖類(lèi)物質(zhì)的種類(lèi)和含量會(huì)影響油料制品的品質(zhì)。因此油料種籽中的糖類(lèi)檢測(cè)對(duì)油脂品質(zhì)和安全性具有重要意義。

近日，油料種籽標(biāo)椎GB30390-202X《油料種籽中果糖、葡萄糖、蔗糖、水蘇糖和棉子糖含量的測(cè)定》即將更新。由于GB/T30390-2013《油料種籽中果糖、葡萄糖、蔗糖含量的測(cè)定高效液相色譜法》標(biāo)齡長(zhǎng)，且沒(méi)有涉及現(xiàn)在比較火熱的水蘇糖和棉子糖。方法上只有液相色譜法，也沒(méi)有提及離子色譜技術(shù)。因此，有關(guān)部門(mén)對(duì)該標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行了修訂。

本文采用離子色譜法對(duì)油料種籽中果糖、葡萄糖、蔗糖、水蘇糖和棉子糖含量測(cè)定。筆者采用皖儀科技離子色譜儀配置安培檢測(cè)器，手配N(xiāo)aOH和水為淋洗液。該方法前處理簡(jiǎn)單，回收率好，靈敏度高，適用于標(biāo)椎《油料種籽中果糖、葡萄糖、蔗糖、水蘇糖和棉子糖含量的測(cè)定》。

關(guān)鍵詞：油料種籽、離子色譜、糖

1.儀器設(shè)備及試劑

1.1離子色譜配置清單

表1儀器配置清單表

序號(hào)	名稱(chēng)	數(shù)量
1	IC6300智能型離子色譜儀	1臺(tái)
2	AS3100自動(dòng)進(jìn)樣器	1臺(tái)
3	SmartLabCDS2.0色譜使用工作站	1套
4	PA20 6.5μm3.0x250mm	1個(gè)

1.2試劑及標(biāo)準(zhǔn)品清單

表2試劑及標(biāo)品清單表

序列	試劑及標(biāo)準(zhǔn)品	純度
1	50%氫氧化鈉溶液	分析級(jí) （離子色譜專(zhuān)用）
2	冰乙酸	色譜級(jí)
3	石油醚	分析級(jí)
4	乙酸鋅	分析級(jí)
5	亞鐵氰化鉀	分析級(jí)
6	葡萄糖	99%
7	果糖	99%
8	蔗糖	99%
9	水蘇糖	99%
10	棉子糖	99%

1.3實(shí)驗(yàn)材料及輔助設(shè)備

抽濾裝置；

超聲波清洗機(jī)；

萬(wàn)分之一天平；

一次性注射器（2mL）；

水系針式過(guò)濾器（0.22μm）；

超純水，電導(dǎo)率為18.2MΩ·cm（25℃）。

2.實(shí)驗(yàn)方法

2.1溶液配置

2.1.1乙酸鋅溶液（1mol/L）：稱(chēng)取21.9g乙酸鋅，加3mL冰乙酸，加水溶解稀釋至100mL。

2.1.2亞鐵氰化鉀溶液（1mol/L）：稱(chēng)取10.6g亞鐵氰化鉀，加水溶解稀釋至100mL。

2.1.3氫氧化鈉溶液（200mmol/L）：量取10.5mL的50%氫氧化鈉溶液，用預(yù)先脫氣的水稀釋并定容至1000mL，氮?dú)獗Ｗo(hù)。

2.2樣本前處理

2.2.1樣本提取

稱(chēng)取試樣5g（精確至0.1mg），置于50mL具塞離心管中，加入25mL石油醚，漩渦振蕩1min，2000r/min離心5min，棄去上層石油醚。重復(fù)上述步驟2次。60℃水浴蒸發(fā)殘留的石油醚，用玻璃棒將樣品轉(zhuǎn)移至150mL恒重的錐形瓶中，用50mL水分兩次沖洗離心管，洗液并入錐形瓶，緩慢加入乙酸鋅溶液和亞鐵氰化鉀溶液各5mL，再加水至溶液總質(zhì)量約為100g（精確至1mg），室溫?cái)嚢?/span>30min后，用定性快速濾紙過(guò)濾，濾液再用0.22μm針式過(guò)濾器過(guò)濾，得到待測(cè)樣品，同時(shí)做空白試驗(yàn)。

2.3實(shí)驗(yàn)條件

2.3.1色譜條件

色譜柱：PA20，3.0×250mm

流動(dòng)相：A相：200mM NaOH；B相：純水C相：20mM NaOH

流速：0.4mL/min

運(yùn)行時(shí)間：65min

柱溫：30℃

檢測(cè)區(qū)溫：30℃

檢測(cè)器：金電極，糖類(lèi)，四電位

進(jìn)樣體積：10µL

表3梯度淋洗

時(shí)間(min)	類(lèi)型	A相：200mM NaOH	B相：水	C相：20mM NaOH
0	線(xiàn)性	0	50	50
20	線(xiàn)性	0	50	50
20.1	線(xiàn)性	100	0	0
30	線(xiàn)性	100	0	0
30.1	線(xiàn)性	0	50	50
65	線(xiàn)性	0	50	50

3實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.1標(biāo)準(zhǔn)品譜圖

20分鐘內(nèi)完成5種糖類(lèi)的測(cè)定，各峰均有良好的峰形，無(wú)峰形拖尾現(xiàn)象，各化合物響應(yīng)良好，符合實(shí)驗(yàn)測(cè)定需求。

圖1 5種糖色譜圖（0.5mg/L）

表1系統(tǒng)適應(yīng)性結(jié)果

離子	保留時(shí)間	分離度
葡萄糖	8.625	1.511
蔗糖	9.692	2.144
果糖	11.125	2.571
水蘇糖	13.275	4.259
棉子糖	18.075	n.a.

3.2線(xiàn)性范圍

取適量混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，逐級(jí)稀釋到系列濃度制作標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，線(xiàn)性范圍0.05~20mg/L，線(xiàn)性檢測(cè)結(jié)果與已知濃度的偏差小于最大允許偏差，R²范圍在0.99985~1.00000之間，各組分線(xiàn)性關(guān)系良好。

表2 各化合物線(xiàn)性范圍表

化合物	線(xiàn)性范圍	線(xiàn)性相關(guān)系數(shù)R²
葡萄糖	0.05-20mg/L	1.00000
蔗糖	0.05-20mg/L	0.99985
果糖	0.05-20mg/L	0.99999
水蘇糖	0.05-20mg/L	0.99999
棉子糖	0.05-20mg/L	0.99998

圖2 5種糖線(xiàn)性結(jié)果

3.3精密度

按2.2.1提取大豆樣品溶液，在2.3.1儀器條件下連續(xù)進(jìn)樣6針測(cè)定。結(jié)果如下表所示，大豆樣品中五種糖相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差均在1%以?xún)?nèi)。樣品檢測(cè)可靠，方法精密度良好。

表3 大豆樣品精密度結(jié)果

序號(hào)	葡萄糖		蔗糖		果糖		水蘇糖		棉子糖
序號(hào)	保留時(shí)間	峰面積	保留時(shí)間	峰面積	保留時(shí)間	峰面積	保留時(shí)間	峰面積	保留時(shí)間	峰面積
1	8.508	674.064	9.425	9732.960	11.000	427.438	未檢出	未檢出	17.450	848.055
2	8.525	672.865	9.45	9661.781	11.017	424.604	未檢出	未檢出	17.492	845.621
3	8.533	669.040	9.467	9686.701	11.033	422.191	未檢出	未檢出	17.500	846.648
4	8.567	661.757	9.517	9647.158	11.058	426.463	未檢出	未檢出	17.567	842.108
5	8.558	657.606	9.500	9611.206	11.042	422.181	未檢出	未檢出	17.500	837.924
6	8.600	666.787	9.600	9494.508	11.100	421.93	未檢出	未檢出	17.842	843.925
平均	8.548	667.020	9.493	9639.052	11.042	425.801	未檢出	未檢出	17.558	845.047
RSD/%	0.389	0.958	0.653	0.847	0.316	0.568	未檢出	未檢出	0.819	0.432

圖3 大豆中四種糖精密度重疊色譜圖

3.4樣品檢測(cè)結(jié)果

3.4.1水分檢測(cè)

取待測(cè)大豆和芝麻樣品，按GB/T14489.1測(cè)定樣品中水分含量。結(jié)果如下表所示。

表4 樣品水分結(jié)果

樣品名稱(chēng)	m₀/g	m₁/g	m₂/g	w/%
大豆-1	52.0858	57.8970	57.2161	11.72
大豆-2	50.8589	56.6956	56.0093	11.76
芝麻-1	52.3609	57.3794	57.1181	5.21
芝麻-2	49.3781	54.4998	54.2264	5.34

3.4.2樣品檢測(cè)

取待測(cè)大豆和芝麻樣品，按2.2.1提取樣品溶液，在2.3.1儀器條件下進(jìn)樣測(cè)定。樣品檢測(cè)結(jié)果如下表所示，大豆和芝麻樣品檢測(cè)可靠，結(jié)果良好。

表5樣品檢測(cè)結(jié)果

樣品名稱(chēng)	離子	上機(jī)濃度(mg/L)	水分/%	樣品中糖的含量w/(mg/g)
大豆-1	葡萄糖	1.0120	11.72	2285.54
	蔗糖	12.688	11.72	57310.06
	果糖	1.195	11.72	2698.83
	水蘇糖	/	/	/
	棉子糖	2.493	11.72	5630.28
大豆-2	葡萄糖	0.712	11.76	1611.30
	蔗糖	11.313	11.76	51203.92
	果糖	0.776	11.76	1756.13
	水蘇糖	/	/	/
	棉子糖	2.308	11.76	5223.13
芝麻-1	葡萄糖	8.398	5.21	1768.94
	蔗糖	14.828	5.21	3123.35
	果糖	5.690	5.21	1198.53
	水蘇糖	2.188	5.21	4608.77
	棉子糖	1.975	5.21	416.01
芝麻-2	葡萄糖	6.434	5.34	1359.42
	蔗糖	13.880	5.34	2932.66
	果糖	4.226	5.34	892.90
	水蘇糖	2.234	5.34	4720.15
	棉子糖	2.092	5.34	442.01

圖4大豆-1樣品稀釋200倍測(cè)試譜圖

圖5芝麻-1樣品稀釋100倍測(cè)試譜圖

4結(jié)論

本方法采用皖儀科技離子色譜IC6300系列配置安培檢測(cè)器，建立離子色譜法測(cè)定油料種籽中果糖、葡萄糖、蔗糖、水蘇糖和棉子糖。樣品通過(guò)前處理，然后經(jīng)離子色譜柱分離，采用外標(biāo)法定量，對(duì)油料種籽中果糖、葡萄糖、蔗糖、水蘇糖和棉子糖進(jìn)行定性、定量分析。由數(shù)據(jù)可得該方法的各色譜峰峰形良好、無(wú)拖尾，靈敏度符合國(guó)標(biāo)要求，線(xiàn)性相關(guān)系數(shù)均大于0.999。說(shuō)明了該方法配備皖儀科技離子色譜系統(tǒng)滿(mǎn)足對(duì)待測(cè)樣本的常規(guī)性定性定量檢測(cè)需求。

下載解決方案